Superior effect of MP-AzeFlu than azelastine or fluticasone propionate alone on reducing inflammatory markers. Fecha: Martes 22 de enero de 2019
Superior effect of MP-AzeFlu than azelastine or fluticasone propionate alone on reducing inflammatory markers.
Authors:
Roca-Ferrer J1,2, Pujols L1,2, Pérez-González M1,2, Alobid I1,2,3, Callejas B1,2, Vicens-Artés S1,2, Fuentes M1,2, Valero A1,2,4, Picado C1,2,4, Castor D5, Nguyen D5, Mullol J1,2,3.
1 Clinical and Experimental Respiratory Immunoallergy, Institut d'Investigacions Biomèdiques August Pi i Sunyer (IDIBAPS), Barcelona, Spain.2 Centro de Investigaciones Biomédicas en Red de Enfermedades Respiratorias (CIBERES), Madrid, Spain.
3 Rhinology Unit & Smell Clinic, ENT Department, Hospital Clínic, Universitat de Barcelona, Villarroel 170, 08036 Barcelona, Catalonia Spain.
4 Allergy Section, Respiratory and Allergy Department, Hospital Clínic, Universitat de Barcelona, Barcelona, Spain.
5 Clinical Science & Operations, Meda Pharma GmbH & Co. KG (A Mylan Company), Bad Homburg, Germany.
Abstract:
BACKGROUND:
MP-AzeFlu, intranasal formulation of azelastine hydrochloride (AZE) and fluticasone propionate (FP), is superior to AZE or FP alone for treatment of allergic rhinitis (AR). However, the precise anti-inflammatory mechanism of action of MP-AzeFlu has not been characterized.
OBJECTIVE:
To investigate the anti-inflammatory effects of MP-AzeFlu compared with AZE or FP alone in an established in vitro model of eosinophilic inflammation.
METHODS:
Nasal mucosal epithelial cells and peripheral blood eosinophils were obtained from human volunteers. Epithelial cells were stimulated with 10% fetal bovine serum (FBS) in the presence of MP-AzeFlu, AZE, or FP (1:102 to 1:105 dilution). Concentrations of interleukin (IL)-6, IL-8, and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) were measured by ELISA. Eosinophils were incubated in 10% human epithelial cell-conditioned medium (HECM) and survival assessed by trypan blue dye exclusion. Results are expressed as mean ± SEM percentage secretion/survival compared with FBS/HECM (respectively).
RESULTS:
FP and MP-AzeFlu (all dilutions) and AZE (1:102) significantly reduced IL-6 secretion and eosinophil survival compared with positive controls. At 1:102 dilution, IL-6 secretion was significantly lower with MP-AzeFlu (38.3 ± 4.2%, compared with FBS = 100%) than with AZE (76.1 ± 4.9%) or FP (53.0 ± 4.9%). At 1:102 dilution, eosinophil survival was significantly lower with MP-AzeFlu at day 3 (17.5 ± 3.0%) and day 4 (2.4 ± 1.4%, compared with HECM = 100%) than with AZE (day 3: 75.2 ± 7.2%; day 4: 44.0 ± 9.7%) or FP (day 3: 38.5 ± 3.5%; day 4: 14.6 ± 4.0%).
CONCLUSION:
Greater reductions in cytokine secretion and eosinophil survival observed with MP-AzeFlu in vitro may underlie MP-AzeFlu's superior clinical efficacy vs. AZE or FP alone observed in AR patients.
DOI: 10.1186/s13223-018-0311-4
MP-AzeFlu (clorhidrato de azelastina y propionato de fluticasona de administración intranasal) es superior para el tratamiento de la rinitis alérgica que la administración individual de azelastina o fluticasona, sin embargo, el mecanismo de acción antiinflamatorio preciso de MP-AzeFlu no se ha caracterizado. El objetivo del estudio pretende brindar una explicación molecular de por qué MP-AzeFlu es superior a sus componentes individuales. Se utilizó un modelo in vitro que utiliza cultivos primarios aislados de células epiteliales de la mucosa nasal y eosinófilos de sangre periférica, este modelo previamente se ha usado para determinar los mecanismos de acción de otros medicamentos usados en la rinitis, y se ha validado ya su utilidad.
ResponderEliminarEl clorhidrato de azelastina y el propionato de fluticasona se diluyeron con dimetilsulfóxido (DMSO) hasta 2,39 × 10 −2 M y 7,29 × 10 −3 M, respectivamente. Estas diluciones de cada fármaco (diez veces más concentradas que las de MP-AzeFlu) se diluyeron con medio de cultivo a 2,39 × 10 −3 M (azelastina) y 7,29 × 10 −4 M (fluticasona), es decir, la concentración encontradas de cada fármaco en MP-AzeFlu. Se prepararon también diluciones adicionales (de dilución 1:10 2 a 1:10 5) con medio de cultivo.
Se usaron muestras de mucosa nasal de 12 pacientes adultos, quienes no tenían diagnóstico de rinitis alérgica, rinosinusitis crónica, pólipos nasales o asma, fueron excluidos los pacientes con tratamientos con glucocorticoides tópicos o sistémicos o antihistamínicos 4 semanas antes de tomar la muestra, también fueron excluidos aquellos con síntomas gripales entre las dos semanas antes de la toma de muestra.
Las muestras se colocaron en medio Ham's F-12 suplementado con 100 UI / mL de penicilina, 100 µg / mL de estreptomicina y 2 µg / mL de anfotericina B y cuando las células alcanzaron una confluencia del 80% se cambiaron a medios RPMI-1640 suplementados con antibióticos (penicilina 100 UI / mL y estreptomicina 100 μg / mL), anfotericina B (2 μg / mL), glutamina (150 μg / ml) y tampón HEPES (25 nM), cuando se realizó el cambio de dilución de adiciono o se dejó libre de varias diluciones de MP-AzeFlu, azelastina o fluticasona, una hora después se incubo con suero bovino fetal (FBS) por 24 horas, luego el cultivo se centrifugo y se almaceno el suero a -80 grados.
La medición de las concentraciones de citoquinas se realizó por medio de prueba de ELISA. Como resultado se encontró que azelastina a 1:10 2 inhibió significativamente la liberación de IL-6 inducida por FBS y aumentó la secreción de GM-CSF de las células epiteliales de la mucosa nasal en comparación con FBS solo. Fluticasona mostró un efecto inhibitorio dependiente de la dosis sobre la secreción de IL-6, IL-8 y GM-CSF inducida por FBS a diluciones de 1:10 2 a 1:10 5. MP-AzeFlu, en diluciones 1:10 2 a 1:10 5 mostró un efecto inhibidor dependiente de la dosis sobre la secreción de IL-6 e IL-8 inducida por FBS. La secreción de GM-CSF fue inhibida por MP-AzeFlu de 1:10 3 a 1:10 5 diluciones, sin efecto a dilución 1:10 2. Al comparar el efecto de Fluticasona con MP-AzeFlu (de diluciones 1:10 2 a 1:10 5), no hubo diferencias significativas en la inhibición de la secreción de GM-CSF o IL-8. Sin embargo, con cada fármaco a la dilución 1:10 2 el efecto inhibitorio de MP-AzeFlu en la secreción de IL-6 fue significativamente mayor que el de azelastina o fluticasona.
Con respecto a la muestra de eosinófilos, esta se tomó de 9 pacientes adultos con más de 3% de eosinófilos en sangre periférica y se aplicaron los mismos criterios de exclusión que en la toma de muestra de mucosa nasal, sin embargo en este grupo de pacientes algunos tenían rinitis, rinosinusitis con poliposis nasal o asma. Los eosinófilos se incubaron en placas de cultivo de tejidos con RPMI en presencia o ausencia de varias diluciones de los medicamentos durante una hora, luego se adicionaron secreciones de células epiteliales al 10%. %. El índice de supervivencia de eosinófilos se evaluó a las 24 h (día 1), 48 h (día 2), 72 h (día 3) y 96 h (día 4) de la incubación por exclusión de colorante azul tripán.
ResponderEliminarComo resultado se obtuvo que en los días 3 y 4, MP-AzeFlu y Fluticasona (dilución 1:10 2 a 1:10 5) inhibieron significativamente la supervivencia de eosinófilos inducida por HECM. En los días 3 y 4, el efecto inhibitorio de MP-AzeFlu a la dilución 1:10 2 fue significativamente mayor que azelastina o fluticasona a la misma dilución. Solo azelastina en la dilución 1:10 2, redujo significativamente la supervivencia de los eosinófilos.
Se ha demostrado en otros estudios que los mediadores inflamatorios IL-6, GM-CSF e IL-8, así como los eosinófilos, desempeñan un papel importante en las enfermedades inflamatorias de las vías respiratorias. Por ejemplo la IL-6 actúa como un pirógeno endógeno, estimulando la respuesta de fase aguda, estimulando los linfocitos T, induciendo la diferenciación terminal de los linfocitos B, y estimulando la producción de inmunoglobulina. GM-CSF desempeña un papel fundamental en la maduración, la quimiotaxis, la supervivencia y la activación de los eosinófilos además participa en la regulación de la secreción glandular mediante la inducción de la liberación de lactoferrina. IL-8, además de tener una potente actividad sobre los neutrófilos, puede causar la liberación de histamina basófila e inducir actividad quimiotáctica en los eosinófilos.
Se concluye que tanto MP-AzeFlu como fluticasona reducen la expresión de citoquinas importantes y reducen la supervivencia de los eosinófilos. MP-AzeFlu reduce tanto la secreción de citoquinas de células epiteliales nasales como la supervivencia de eosinófilos más que la azelastina o la fluticasona administrados solos. Este estudio demuestra un mecanismo de acción que puede subyacer al efecto clínico superior de MP-AzeFlu en rinitis alérgica y no alérgica cuando se compara con sus componentes utilizados como monoterapia.