Capítulo A1 Alergollogy from extracts to molecules: Integrating tadition with innovation. EAACI Molecular Allergology User´s Guide.
Capítulo A1: Alergollogy from extracts to molecules: Integrating tadition with innovation.
Authors: Paolo Maria Matricardi, Jörg Kleine-Tebbe, Hans Jürgen Hoffmann, Rudolf Valenta, Markus Ollert.
Abstract:
The transition from allergen extracts to molecules for the diagnostic work-up of IgE mediated reactions/diseases has great potential, but requires detailed knowledge and intelligent interpretation Diagnostic algorithms traditionally start with the history (“top-down”), followed by skin tests, then IgE assays adding allergen molecules for “component-resolved diagnosis” (CRD) Novel diagnostics invert the test order (“bottom-up”) and start with a multiplex (i.e. microarray-based) IgE assay and many components. Then the history is reviewed for concordance to establish a broad CRD Combining both strategies, “top-down” and “bottom-up”, creates a “U-shaped” sequence. Traditional diagnostic work-up can thus be expanded by a broad screening for IgE-binding molecules unfolding missing details and feeding back to a molecular allergy diagnosis.
Los anticuerpos de inmunoglobulina E (IgE) son un marcador y un importante contribuyente en las reacciones de hipersensibilidad inmediata y las enfermedades atópicas.La composición y cantidad de un extracto alergénico afecta fuertemente el resultado de los ensayos tradicionales de IgE a base de extracto. Por lo tanto, los ensayos de IgE producidos por diferentes compañías generan a menudo varios niveles cuantitativos y, a veces, resultados cualitativos no conformes (positivos versus negativos).
ResponderEliminarFundamentos respaldan el uso selectivo de moléculas de alérgenos y mejoran las propiedades de la prueba: -aumento de la sensibilidad de la prueba
-mejora de la selectividad de la prueba,cuando el repertorio de IgE seleccionado contra un alérgeno proporciona información adicional sobre, riesgos potenciales, posible reactividad cruzada, osensibilización primaria .
El"diagnóstico resuelto por componenetes" (CRD) permite un perfil molecular detallado del repertorio policlonal de IgE del paciente alérgico, integra datos genéticos o moleculares individuales novedosos para mejorar el genotipo / fenotipo y la selección adecuada de tratamientos personales. La lista de moléculas alergénicas importantes, clonadas o purificadas e introducidas con fines de diagnóstico, aún está incompleta. Además, los costos de los ensayos de IgE con alérgenos individuales son aproximadamente un 10% más altos.
La transición de extractos de alérgenos a moléculas para el diagnóstico de reacciones / enfermedades mediadas por IgE tiene un gran potencial, pero requiere un conocimiento detallado e interpretación adecuada.
ResponderEliminarLos algoritmos de diagnóstico comienzan tradicionalmente con el historial ("de arriba hacia abajo"), seguido de pruebas cutáneas, luego, los ensayos de IgE que agregan moléculas de alérgenos para el "diagnóstico resuelto por componentes" (CRD).
Los nuevos diagnósticos invierten el orden de la prueba ("de abajo hacia arriba") y comienzan con un ensayo de IgE multiplex (es decir, basado en microarrays) y muchos componentes. Luego, se revisa la historia para determinar la concordancia para establecer un CRD amplio.
La combinación de ambas estrategias, "de arriba hacia abajo" y "de abajo hacia arriba", crea una secuencia en "U". La evaluación diagnóstica tradicional puede, por lo tanto, ampliarse mediante una amplia detección de moléculas que se unen a IgE que despliegan detalles faltantes y retroalimentan un diagnóstico de alergia molecular.
DISCREPANCIAS ENTRE EXTRACTO DE ALÉRGENO Y RESULTADOS DEL ENSAYO DE IGE A BASE DE ALÉRGENOS MOLÉCULOS
Los resultados no concordantes entre los ensayos de IgE basados en extractos y moleculares pueden tener varias características y explicaciones
A. Extracto de alérgenos positivo pero sus moléculas negativas:. Los niveles de anticuerpos IgE en suero para las moléculas implicadas podrían estar por debajo del LoQ (límite inferior de cuantificación) del ensayo molecular pero por encima del LoQ del ensayo de extracto.
B. Extracto de alérgenos negativo pero sus moléculas positivas: el nivel de anticuerpos IgE en suero contra las moléculas implicadas podría estar por encima del LoQ (límite inferior de cuantificación) del ensayo molecular pero por debajo del LoQ del ensayo de extracto.
C. Extracto de alérgenos positivo pero sus componentes genuinos son negativos: en este caso, la IgE del suero podría reconocer solo componentes menores y altamente reactivos de un extracto alergénico, pero no sus componentes genuinos específicos de especie (principales).
D. Extracto de alérgenos menos positivo que los niveles de ensayo molecular agregado: el nivel de IgE en suero para un extracto alergénico podría ser mucho más bajo que la suma de los niveles de IgE a todos sus componentes. La reactividad cruzada potencial (parcial) entre alérgenos estructuralmente no relacionados (es decir, Ara h 1, 2 y 3) de diferentes familias de proteínas, lo que lleva a valores de suma arbitrariamente altos después de agregar resultados de ensayos moleculares en comparación con el resultado del extracto.
¿Cómo debe integrarse un enfoque molecular en la evaluación diagnóstica del paciente alérgico? Este enfoque se ha denominado enfoque de diagnóstico "de arriba hacia abajo", que incluye el primer historial clínico con ensayos de SPT o IgE para extractos y luego el paso molecular. Los otros prefieren usar microarrays que proporcionan una visión amplia y analítica del perfil de sensibilización del paciente.
ResponderEliminarArgumentos para el primer y el segundo enfoque:
Los argumentos planteados a favor de un enfoque de arriba hacia abajo o en contra de un enfoque de abajo hacia arriba.
1. Los extractos son herramientas de detección esenciales a las que la mayoría de los médicos están acostumbrados; no pueden eliminarse como diagnósticos de rutina.
2. Los microarrays son demasiado complejos y detallados; Los médicos aún no están preparados para interpretarlos adecuadamente.
3. Los microarrays ofrecen información útil, si está vinculada a síntomas clínicos individuales, pero también información sobre sensibilizaciones que no están vinculadas a ningún síntoma.
4. El uso de reactivos seleccionados individualmente, que cubren extractos y moléculas para las pruebas, facilita el uso del enfoque singleplex para el diagnóstico molecular.
5. Los reactivos basados en extractos contienen más moléculas que las incluidas en un microarray o en catálogos para pruebas de un solo complejo.
6. Los SPT basados en extractos ofrecen información sobre la función biológica de los anticuerpos IgE, no solo su presencia / ausencia.
7. Las células desgranulantes en pacientes polisensibilizados (la gran mayoría) reaccionan a mezclas complejas de proteínas en el extracto de alérgenos y no solo a moléculas individuales.
Argumentos planteados a favor de un enfoque BOTTOM-UP o en contra de un enfoque TOP-DOWN
ResponderEliminar1. Los pacientes deben ser examinados con un enfoque multiplexado (microarrays) para obtener una evaluación global de su repertorio de IgE individual
2. Cualquier paso o enfoque que utilice extractos está desactualizado y no es confiable, porque los extractos no siempre se caracterizan y estandarizan adecuadamente.
3. Los pacientes deben ser examinados con un enfoque multiplexado (microarrays) para una evaluación global de todo el perfil de sensibilización.
4. Los resultados positivos en una micromatriz, incluso si no son clínicamente relevantes en la actualidad, pueden predecir síntomas alérgicos futuros.
5. El enfoque de abajo hacia arriba, realizado con una micromatriz, reduciría la cantidad de contactos paciente-médico-laboratorio, mientras que un enfoque "reflejo" único requeriría varias consultas.
6. El uso más amplio de microarrays inducirá a las empresas a reducir los precios en vista de una distribución más amplia.
7. Se debe superar la resistencia de los alergólogos al progreso de la alergología molecular, que puede reducir sus ganancias en función de la SPT.
1. Un enfoque ascendente "exclusivo" no sería rentable. Además, la prueba de microarrays no se reembolsa en la mayoría de los países. El fondo-El enfoque ascendente, basado en una micromatriz, es visionario, pero actualmente solo se reembolsa el algoritmo de diagnóstico tradicional que utiliza extractos y el enfoque singleplex.
ResponderEliminar2. La mayoría de los médicos continuarán usando extractos y trabajando con un enfoque de arriba hacia abajo. Un enfoque posterior "en forma de U" debería hacer que la alergología molecular sea accesible para más alergólogos y no solo para los muy pocos "entusiastas" de la alergología molecular y los microarrays.
3. La nueva forma de pensar debe introducirse paso a paso. El uso de microarrays será más fácil una vez que los médicos hayan aprendido a usar moléculas individuales (singleplex). 4. Debemos evitar los problemas legales / de calidad de vida generados al conocer la sensibilización a las moléculas. (p. ej., LTP) potencialmente sin relevancia clínica (p. ej., en el sur de Europa) pero siempre probado en una micromatriz, independientemente de la pregunta de diagnóstico del paciente. El manejo de resultados ocasionales o espectadores en medicamentos siempre es difícil.